Desenvolvimento de Nanopartículas para Terapia Gênica Direcionada À Micrornasda Vida do Fator Induzido por Hipóxia (Hif) em Gliomas de Alto Grau
- Fundação de Apoio Ao Ensino Pesquisa e Assistência do Hospital das Clínicas da Fmrp-Usp-Faepa
- Programa
- Pesquisa
- Em atualização
- Em atualização
- R$ 3.092.032,89
- Valor Inicial do Projeto
- 27
- Estados Atendidos
Descrição do Projeto
Desenvolvimento de nanocarreadores sintéticos como veículos de drogas biológicas que, no caso em tela, tratam-se de moléculas similares a microRNAs (miR-mimics) ou antimicroRNAs (antagomiRs), direcionadas à via do HIF, como estratégia para o tratamento adjuvante nos gliomas de alto grau.
Objetivos
1. Obtenção e modificação controlada de lipossomas para permitir ajustes de permeação e liberação de drogas biológicas nas culturas celulares de gliomas de alto grau.
2. Manipulação estrutural de nanopartículas, lipídicas poliméricas e proteicas, em sistema multilayer.
3. Incorporação de antagomiRs e miR-mimics nas nanopartículas para a modulação da expressão de genes relacionados à via do HIF.
4. Encapsulamento das nanopartículas luminescentes carregadas com moduladores de miRs para marcação óptica seletiva.
5. Cultura e expansão de linhagens celulares de gliomas de alto grau em condições “padrão” (normóxia) e de estresse celular (hipóxia).
6. Avaliar diferentes composições químicas das nanopartículas, quanto à sua efetiva incorporação pelas células neoplásicas e células endoteliais, em diferentes condições de cultivo.
7. Avaliar a expressão de genes relacionados à hipóxia e de microRNAs nas 3 culturas que apresentarem melhor crescimento, nas condições padrão e de estresse celular (hipóxia).
8. Avaliar a expressão de HIF-1α pelas células neoplásicas, antes e após o estabelecimento da hipóxia, em diferentes intervalos de tempo.
9. Padronização dos ensaios de transfecção com lipofectamina.
10. Transfecção das culturas celulares com os moduladores de microRNAs de interesse (miR-mimics/antagomiRs; n = 5).
11. Tratamento das culturas células com nanopartículas contendo os moduladores de microRNAs.
12. Avaliação da efetiva incorporação, tanto pelas células neoplásicas como em células endoteliais, das nanopartículas carregadas com os moduladores de microRNAs (NanoCs).
13. Avaliação da expressão dos microRNAs-alvo (antagomiRs) e dos RNAm-alvo (miR-mimics) após o tratamento das culturas celulares com os NanoCs.
14. Realização de testes funcionais para apoptose, viabilidade e proliferação celular e invasão antes e após o tratamento com os NanoCs.
15. Geração do relatório final, publicações e entrega de 3 sistemas nanoestruturados para a validação em modelos animais.
2. Manipulação estrutural de nanopartículas, lipídicas poliméricas e proteicas, em sistema multilayer.
3. Incorporação de antagomiRs e miR-mimics nas nanopartículas para a modulação da expressão de genes relacionados à via do HIF.
4. Encapsulamento das nanopartículas luminescentes carregadas com moduladores de miRs para marcação óptica seletiva.
5. Cultura e expansão de linhagens celulares de gliomas de alto grau em condições “padrão” (normóxia) e de estresse celular (hipóxia).
6. Avaliar diferentes composições químicas das nanopartículas, quanto à sua efetiva incorporação pelas células neoplásicas e células endoteliais, em diferentes condições de cultivo.
7. Avaliar a expressão de genes relacionados à hipóxia e de microRNAs nas 3 culturas que apresentarem melhor crescimento, nas condições padrão e de estresse celular (hipóxia).
8. Avaliar a expressão de HIF-1α pelas células neoplásicas, antes e após o estabelecimento da hipóxia, em diferentes intervalos de tempo.
9. Padronização dos ensaios de transfecção com lipofectamina.
10. Transfecção das culturas celulares com os moduladores de microRNAs de interesse (miR-mimics/antagomiRs; n = 5).
11. Tratamento das culturas células com nanopartículas contendo os moduladores de microRNAs.
12. Avaliação da efetiva incorporação, tanto pelas células neoplásicas como em células endoteliais, das nanopartículas carregadas com os moduladores de microRNAs (NanoCs).
13. Avaliação da expressão dos microRNAs-alvo (antagomiRs) e dos RNAm-alvo (miR-mimics) após o tratamento das culturas celulares com os NanoCs.
14. Realização de testes funcionais para apoptose, viabilidade e proliferação celular e invasão antes e após o tratamento com os NanoCs.
15. Geração do relatório final, publicações e entrega de 3 sistemas nanoestruturados para a validação em modelos animais.
Resultados Esperados
Pesquisa
