Estabelecer uma plataforma múltipla de produção de células imunes reprogramadas com CARs anti-CD19 e anti-CD99, partindo de células de sangue periférico e/ou sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) criopreservado, no serviço de Hematologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC/FMUSP), com intenção de aplicá-las futuramente como produtos de Terapia Celular contra doenças onco-hematológicas.

Células CAR-NK-19
- Produção de células CAR-NK anti-CD19 a partir de células NK periféricas de voluntários através do equipamento CliniMACS® Prodigy, com o uso de transfecção lentiviral;
- Estabelecer protocolo do uso de células NK de SCUP no equipamento CliniMACS® Prodigy com o uso de transfecção lentiviral;
Células CAR-iNK-99
- Desenvolver células NK derivadas de diferentes origens (hiPSC ou cordão umbilical) capazes de expressar o CAR-CD99 através da técnica CRISPR-Cas9 e confirmar a expressão de CAR-CD99 por citometria de fluxo
- Avaliar fenótipo de células NK transduzidas para a expressão de CAR, e sua capacidade de lise contra alvos tumorais, degranulação celular e produção de citocinas
CAR-Mono-19
- Estabelecimento de um protocolo de eletroporação do sistema de transposon piggyBAC em monócitos, células dendríticas e macrófagos provenientes de SCUP e Sangue Periférico;
- Produção de células imunes expressando um receptor quimérico específico para o antígeno de superfície CD19 através de modificação genética pelo sistema de transposon piggyBAC;
- Comparar a eficiência de transdução e viabilidade de CARs em monócitos, MΦ e DCs derivadas de sangue periférico e SCUP utilizando distintos protocolos de diferenciação in vitro, visando padronizar e validar sua produção, avaliando parâmetros como: fenótipo, função, capacidade fagocitica, produção de citocinas/quimiocinas e estimulação de células T;

Pesquisa