Padronizar método de análise da Doença Residual Mínima por sequenciamento massivo, comparando resultados com os obtidos pelo método de PCR quantitativo.

Realizar testes de sensibilidade e linearidade de quantificação de rearranjos IgH por sequenciamento de última geração
a. Testar dois diferentes conjuntos de primers, próprios para PCR em duas etapas de amplificação dos rearranjos IgH.
b. Testar amplificação de IgH por PCR em uma etapa e adição posterior de adaptadores do sequenciamento com kit TruSeq DNA sample prep (Illumina).
c. Desenhar e testar primers para uso com kit TrueSeq Custom Amplicon (Illumina), que consiste em um único ciclo de extensão e ligação, seguido de amplificação por PCR e adição de adaptadores
d. Testar vantagens do uso de um controle externo ('spyke control) para normalizar o número de 'reads' lidos.
e. Desenhar e testar primers para amplificação de N-RAS em multiplex com primers para rearranjos IgH, avaliando seu uso como normalizador do número de 'reads'.
f. Testar influência de variação no número de ciclos de PCR, seja para o caso de amplificação em 2 etapas ou para amplificação em uma única etapa.
g. Testar adição de DNA da biblioteca controle phiX174 em quantidades de 10%, 30%, 45%, para facilitar individualização dos clusters na leitura do sequenciamento.
2. Fazer analise de DRM por RQ-PCR e sequenciamento NGS, em amostras pareadas de DNA da medula óssea do dia 35, em 100 casos de LLA.
3. Comparar resultados de DRM por sequenciamento versus RQ-PCR.

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